Staphylococcus aureus 'a karşı faj litik proteininin antibakteriyel özelliğinin araştırılması
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Yıldız Teknik Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, MOLEKÜLER BİYOLOJİ VE GENETİK ANABİLİM DALI, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2022
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: HANDE HANÇER
Danışman: Tülin Özbek
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Antimikrobiyal direnç profilinden dolayı dünyada ve ülkemizde giderek artan hastane kaynaklı enfeksiyonların en yaygın sebepleri arasında Staphylococcus aureus yer almaktadır. Çoklu ilaç direncine sahip S. aureus enfeksiyonlarının tedavisi amacıyla antibiyotiklere alternatif umut verici yeni yaklaşımlara veya terapötik yeni ajanlara ihtiyaç duyulmaktadır. Bu amaçla son yıllarda bakteriyofajlar ve faj türevleri, bakteriyal hastalıklarla mücadelede potansiyel adaylar olarak tekrar önemini kazanmaya başlamıştır. Bu bilgiler ışığında sunulan tez çalışmasında, S. aureus fajının konakçı üzerinde litik aktiviteye sahip Holin proteininin rekombinant DNA teknolojisi ile üretimi ve antimikrobiyal etkinliğinin değerlendirilmesi amaçlanmıştır. Öncelikle, S. aureus faj genomundaki Holin geni, sinyal sekansı varlığı ve yokluğunu sağlayacak primerler ile amplifiye edilerek pLATE51 vektörüne klonlanmıştır. Klonlanan genlerin (Holin ve SKHol) doğruluğu koloni PZR ve sekans analizi ile gerçekleştirildikten sonra Escherichia coli Bl21(DE3) ekspresyon suşuna transforme edilmiştir. rHolin ve rSKHol proteinlerinin ekspresyonu ve saflaştırılması sonrası bakteriyel lizis etkinliği spektrofotometrik, turbitidimetrik ve standart petri sayımı yöntemleri ile değerlendirilmiştir. İlaveten, ilgili proteinlerin antibakteriyel ajan olarak kullanım potansiyeli agar kuyucuk diffüzyon ve spot testleri ile değerlendirilmiştir. Çalışma sonucunda, her iki proteinin de S. aureus bakterisini lize ettiği kontrol gruplarıyla karşılaştırmalı olarak tespit edilmiştir. rHolin'in antibakteriyel etkinliğinin rSKHol'e göre daha yüksek olduğu sırasıyla 16 ve 10 mm inhibisyon zon çapları ile belirlenmiştir. Elde edilen bu bilgiler ışığında, özellikle rHolin proteininin saflaştırılması halinde sağlık, gıda, tarım ve kozmetik gibi birçok alandan kullanım potansiyeli yüksektir.