İnsan Yağ Dokusundan Elde Edilen Mezenkimal Kök Hücrelerin İzolasyonu, Devamlı Kültürünün Yapılması, Karakterizasyonu ve Kriyoprezervasyonu

---

Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Yıldız Teknik Üniversitesi, Kimya-Metalurji Fakültesi, Biyomühendislik Böl., Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2010

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: Serap Yeşilkır

Danışman: Adil Allahverdiyev

Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu

Özet:

Günümüzde adipoz doku kaynaklı mezenkimal kök hücreler (AD-MKH) ile ilgili çalışmalara olan ilgi hızla artmaktadır. Bunun nedeni adipoz dokunun kemik iliği (Kİ), periferik kan (PK) ve kordon kanı (KK) ile kıyaslandığında daha fazla mezenkimal kök hücre (MKH) içermesidir. Adipoz doku MKH'lerinin uzun süreli kültürü mevcut olan zorluklardan dolayı dünyanın sayılı laboratuarlarında yapılmaktadır. Ülkemizde ise bu konu ile ilgili çalışmalar oldukça sınırlıdır.Buna göre de bu çalışmanın amacı farklı vericilerin adipoz dokusundan MKH izolasyonunu, in vitro kültürde adaptasyonunu, uzun süreli kültürünün yapılmasını ve kriyoprezervasyonunu incelemek olmuştur.Çalışmamızda farklı vericilerin lipoasipirat örnekleri kullanıldı. Deneylerde MKH izolasyonu (kolajenaz tip II ile muamele, basit santrifügasyon ile ayırma), hemasitometre ile hücre sayımı, Tripan mavisi ile hücre canlılık tayini, flow sitometrik immünfenotipleme (CD90 ve CD34), histokimyasal analiz (Oil Red O ve Alizarin Red S), klasik kültür, mikrokültür (MKM) ve kriyoprezervasyon yöntemleri kullanılmıştır.İzole edilen ve uzun süreli kültürü yapılan hücrelerin MKH olmasını belirlemek amacı ile yapılan morfolojik, immüfenotipik (CD90+ %95,98 ve CD34- %98,94), histokimyevi (adipojenik ve osteojenik farklılaştırma) incelemeler elde edilen hücrelerin MKH olduğunu göstermiştir.Çalışmamızda ilk kez olarak MKH'lerin farklı besiyerlerinde (%10 FBS içeren DMEM, IMDM ve DMEM/F12) kültürünün yapılması karşılaştırılarak incelendiğinde % 10 FBS içeren DMEM besiyerinin MKH'ler için en uygun kültür ortamı olduğu ve kültürü zor yapılan veya az sayıda MKH içeren örneklerin kültürünün yapılmasında mikrokültür yönteminin uygulanmasının, MKH'lerin kriyoprezervasyonunda ise hücre sayısının önemli olduğu tespit edilmiştir. Ayrıca MKH'lerin elde edilen uzun süreli kültürü laboratuarımızda polimerlerin toksisitesinin ve enfeksiyon-kök hücre etkileşiminin incelenmesinde uygulanmıştır.Sonuç olarak bu çalışmada elde edilen yeni bilgiler ışığında farklı donörlerden elde edilen MKH'lerin devamlı kültürü ve kriyoprezervasyonu optimize edilmiştir. Ayrıca bu çalışmada elde edilen sonuçlar, TÜBİTAK tarafından yayınlanan 2003-2023 Teknoloji Öngörü Çalışmasında, Türkiye'de kök hücre teknolojilerinin geliştirilmesi ve kök hücrelerin özellikle rejeneratif tıp uygulamalarında kullanılabilir hale gelmesi gerekliliği talebine de uygun olarak yapılmıştır.