Zeytin (Olea europaea) bitkisinden karbonik anhidraz enzimini kodlayan genin klonlanması

---

Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Yıldız Teknik Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, BİYOLOJİ ANABİLİM DALI, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2011

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: MUNİSE YURTSEVER

Danışman: Şenay Vural Korkut

Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu

Özet:

Karbonik anhidraz (CA), çinko içeren bir metalloenzimdir. CO2 ve HCO3- arasında geri dönüşümlü (CO2 + H2O ? HCO3? + H+) reaksiyonunu gerçekleştirir ve hayvanlarda, bitkilerde, arke bakterilerde ve öbakterilerde yaygın olarak bulunur. Farklı evrimsel yollarla gelişmiş 5 farklı CA ailesi vardır: ?, ß, ?, ? ve ?. CA'lar pH düzenlenmesi, CO2 transferi, iyon değişimi, solunum, biyosentez ve fotosentez gibi birçok farklı biyolojik süreçte yer alır. Ayrıca CA transkriptinin farklı abiyotik streslere yanıt olarak anlatımında artış görülür.Bu çalışmada soğuk stresine maruz bırakılmış zeytin bitkilerinden ß-karbonik anhidraz 392 bp uzunluğunda bir cDNA fragmanı klonlandı. Klonlanan cDNA'nın dizini NCBI veritabanında bulunan Oleae europeae kontig dizini ile yüksek oranda benzerlik gösterdi. Kontig dizin bilgisi kullanılarak 3' ve 5' uçları için primerler tasarlandı. Tam uzunlukta cDNA klonlamak için önce 3' RACE reaksiyonları yapıldı ve 1150 bp'lik bir fragman elde edildi. Bu fragman klonlanarak dizin analizi yaptırıldı. BLASTN ve BLASTP analizleriyle tütün ve domates kloroplast CA'ları ile pamuk ve bezelye ß-CA'larına %75 üzerinde benzerlik gösterdiği saptandı. İki primer birlikte kullanılarak genomik DNA'dan PCR yapıldı. Yaklaşık 900 bp'lik bir fragman elde edilerek klonlandı ve dizin analizi yaptırıldı. Genomik klonların dizinleri cDNA dizinine %95-96 benzerlik gösterdi.